國產便捷式液相色譜儀在藥物分析中的應用和局限性

國產便捷式液相色譜儀在藥物分析領域的幾個應用：

化學藥品的分析

在針對藥物合成的分析方面, UPLC 可實現隨時快速準確檢測合成過程中的中間體、副產物或降解產物等。

生化藥品的分析

利用HPLC和UPLC 分析經柱前衍生化處理后的蛋白質水解物中氨基酸。結果表明, 兩種方法的結果基本一致, 但UPLC的分析時間僅為HPLC 的40% 。

中藥成分的分析

中藥含有大量的生物堿, 通常為中藥的活性成分, 研究這類成分具有重要意義。在采用HPLC 法分析生物堿時, 由于固定相表面殘余硅羥基的影響, 此類化合物色譜峰的保留行為會發生變化, 造成色譜峰嚴重展寬和拖尾, 因而在分析時常需要在流動相中加入添加劑, 如離子對試劑、有機胺類等,用以屏蔽固定相表面殘余硅羥基的作用, 但這些添加劑的加入往往會給LC- MS 聯用帶來不便。部分 UPLC 填料, 減少了固定相表面殘余硅羥基, 因而在分析生物堿類樣品時, 流動相中只加入酸抑制劑, 不需添加有機胺即可使其獲得良好的分離。由于在流動相中避免了有機胺及鹽的加入, 可以在一定程度上降低質譜噪音、減少對質譜的污染, 且使用的流速適合與質譜直接聯用, 無需分流, 可以進一步提高檢測靈敏度。

藥物代謝動力學研究

藥物代謝動力學涉及藥物在肌體內吸收、分布、代謝和排泄過程的研究, 包括藥物及其在各種復雜基質(全血、血漿、尿、膽汁及生物組織)中代謝物的分離、結構鑒定以及痕量分析測定。肌體的體液系統中存在大量的保留時間相同、相對分子質量也相同的干擾組分; 而目前藥物研制日趨低劑量, 使常規的分離檢測技術難以滿足復雜介質中痕量成分準確定量的要求。能否在復雜的體液系統中快速檢測和鑒定出藥物的代謝產物, 依賴于的色譜分離和靈敏的高分辨質譜技術的聯用。采用UPLC - MS聯用技術進行藥物代謝及藥物動力學研究, 體現了其高靈敏度和高專屬性特點, 而且能夠同時測定樣品中復方制劑的多組分濃度, 實現樣品高通量分析。

國產便捷式液相色譜儀的局限性

1、與國產便捷式液相色譜儀匹配的色譜柱比較少

UPLC 是應小粒徑(小于2μm )柱填料的需求而專門設計的耐高壓液相色譜系統, 因此使用小粒填料的色譜柱能夠大限度地發揮UPLC 高分離度和高靈敏度的優勢。但是這種色譜柱要能夠耐受由于粒徑減小而帶來的高反壓,而且粒徑的減小也給色譜柱充填技術帶來了挑戰。

2、峰面積的重復性欠佳

UPLC分析樣品時峰面積的重復性略遜于HPLC, 特別是低濃度樣品時更加明顯, 其峰面積重復性的RSD 約為HPLC的2倍。研究者認為, 可能因UPLC的進樣量過少(僅有2μl) , 或者由于采用了半環( partia l loop)進樣的方式, 理論上這種進樣方式的精密度不如全環( fuIl lop)進樣。通過稀釋樣品, 增加注入樣品的體積,可以改善這種狀況。

3、對高頻檢測儀器的需要

UPLC分離樣品色譜峰擴展很小, 通常峰底寬度只有幾秒鐘, 低濃度的樣品峰則更窄。使用UPLC 測定低濃度樣品時, 準確度、精密度都比較差。這可能是由于檢測儀器探測頻率比較低, 檢測低濃度樣品時出現了樣品點的遺漏。因此, 隨著UPLC 的開發應用, 必將推動高頻檢測儀器的進一步發展。